操作步骤如下：

步骤1：细胞培养板处理

在培养板中，使用PBS对已爬好的细胞玻片进行清洗，重复3次，每次持续3分钟，以确保表面无杂质。

步骤2：固定细胞

接下来，使用4%的多聚甲醛对爬片进行固定，时间为15分钟。随后，用PBS清洗玻片，重复3次，每次3分钟。

步骤3：细胞通透

使用5%的Triton X-100溶液（PBS配制），在室温下通透细胞20分钟（如果细胞膜上抗原可被识别，则此步骤可以省略）。

步骤4：血清封闭

再次用PBS清洗玻片3次，每次3分钟，然后用吸水纸吸去多余的PBS。在玻片上滴加正常山羊血清（确保二抗来源是山羊），在室温下封闭30分钟。

步骤5：添加一抗

用吸水纸吸去封闭液，不再清洗，在每张玻片上滴加适量的稀释一抗，放入湿盒中，于4℃孵育过夜。

步骤6：添加荧光二抗

用PBST对爬片再次清洗3次，每次3分钟。吸水纸吸干多余液体后，滴加稀释好的荧光二抗，在湿盒中于20-37℃孵育1小时。再用PBST清洗切片3次，每次3分钟。请注意，从这一阶段开始，后续所有操作应尽量在低光照条件下进行。

步骤7：再次血清封闭

用吸水纸除去多余液体，在玻片上滴加正常山羊血清（确保二抗来源是山羊），在室温下封闭30分钟。

步骤8：添加第二种一抗

用吸水纸吸去封闭液，不洗，然后滴加稀释好的第二种一抗。完成后于4°C的湿盒中避光孵育过夜。注意，第二种一抗的种属需与第一种不同，如小鼠与兔。

步骤9：添加第二种荧光二抗

用PBST对爬片清洗3次，每次3分钟，吸水纸吸干后滴加稀释好的荧光二抗，放入湿盒中于20-37℃孵育1小时，再用PBST清洗切片3次，每次3分钟。请确保若第一种抗体选用红色荧光，第二种荧光必须选择不同的颜色。

步骤10：染核

滴加DAPI进行核染色，避光孵育5分钟，用PBST清洗四次各5分钟以去除多余的DAPI。

步骤11：观察与拍摄

用吸水纸吸干玻片上的液体，使用含有抗荧光淬灭剂的封片液进行封片，随后在荧光显微镜下观察并采集图像。

产品信息

品名尺寸处理灭菌规格：
J060016 孔板配套圆形细胞爬片24mm，TC处理，伽马射线，100片/盒，10盒/箱
J120011 12孔板配套圆形细胞爬片20mm，TC处理，伽马射线，100片/盒，10盒/箱
J240012 24孔板配套圆形细胞爬片14mm，TC处理，伽马射线，100片/盒，10盒/箱
J480014 48孔板配套圆形细胞爬片8mm，TC处理，伽马射线，100片/盒，10盒/箱
J960019 96孔板配套圆形细胞爬片3mm，TC处理，伽马射线，100片/盒，10盒/箱
J060036 6孔板配套方形细胞爬片24*24mm，TC处理，伽马射线，100片/盒，10盒/箱
J120031 12孔板配套方形细胞爬片14*14mm，TC处理，伽马射线，100片/盒，10盒/箱
J240032 24孔板配套方形细胞爬片10*10mm，TC处理，伽马射线，100片/盒，10盒/箱
J060026 6孔板配套圆形细胞爬片24mm，多聚赖氨酸包被，伽马射线，20片/盒，10盒/箱
J120021 12孔板配套圆形细胞爬片20mm，多聚赖氨酸包被，伽马射线，20片/盒，10盒/箱
J240022 24孔板配套圆形细胞爬片14mm，多聚赖氨酸包被，伽马射线，20片/盒，10盒/箱

注：ag尊龙凯时公司可根据客户需求定制任何规格的细胞爬片，满足广大科研及医疗需求。