ag尊龙凯时的pShuttle-CMV-N-Myc质粒是一种用于在哺乳动物细胞中表达N端Myctag（Myc标签）融合蛋白的重组腺病毒包装的穿梭质粒。构建该质粒后，需要与预转染过pAdEasy-1质粒的BJ5183菌株（8107）以及重组腺病毒包装细胞联用，以完成重组腺病毒的包装。

pShuttle-CMV-N-Myc质粒包含CMV启动子，能够有效促进目标蛋白在细胞中的表达。此外，在多克隆位点的5'端设置了编码Myc标签的序列，这使得通过抗Myc抗体来识别目标蛋白变得更加方便，有助于目标蛋白的检测与分离纯化。这一质粒还具有卡那霉素抗性。

重组腺病毒（Recombinant adenoviruses）是用于在培养细胞或动物体内表达外源基因的重要工具，广泛应用于生物医疗研究中。重组腺病毒具有感染宿主细胞范围广、感染过程中不依赖细胞分裂、具备高滴度及表达外源基因水平高等特性。最常用的人类腺病毒载体是人类血清5型腺病毒。

改造后的腺病毒删除了E1基因和E3基因，前者在病毒组装中发挥重要作用，后者则具有逃避宿主免疫的功能。基因的删除使得重组腺病毒无法自我复制，提供了外源基因插入的空间，最长可插入75kb的外源基因，显著提升了重组腺病毒的安全性与可操作性。包装细胞如AD-293、293A及HEK293携带E1基因，能够完成重组腺病毒的包装工作。

pShuttle系列穿梭质粒在经过PmeI线性化后，与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1（8106）共转染至大肠杆菌BJ5183中，或转染到已预转染pAdEasy-1质粒的BJ5183菌株（8107）中进行同源重组。该菌株表达recET基因，具备极高的基因同源重组活性，使得携带目的基因的穿梭质粒与腺病毒骨架质粒通过末端反向重复序列进行同源重组，最终实现外源基因与腺病毒基因组的整合。

将重组的腺病毒质粒用PacI线性化后，转染至AD-293、293A、HEK293等重组腺病毒包装细胞中进行包装，制备出高滴度、自我复制缺陷且带有目的基因的重组腺病毒。需要注意的是，目的基因在引入时不能包含PmeI和PacI的两种酶切位点，若存在则需要进行突变处理。

pShuttle-CMV-N-Myc质粒的主要信息如下：该质粒的图谱与多克隆位点详细信息，请参考相关说明书。此外，pShuttle-CMV-N-Myc中不含的酶切位点（Restriction enzymes that do not cut pShuttle-CMV-N-Myc）如下所列。

推荐使用的测序引物序列如下：

• Forward primer (888-907): 5' GGTCTATATAAGCAGAGCTG 3'
• Reverse primer (1048-1070): 5' GTGGTATGGCTGATTATGATCAG 3'

pShuttle-CMV-N-Myc的完整序列信息可查阅相应的数据库。请将其储存于-20℃环境中。未经书面许可，本质粒不得用于任何商业用途或转交给其他单位。同时，所有操作需由专业人员在符合实验室安全标准的环境中进行，请务必穿戴实验服和一次性手套，以确保安全和健康。