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NEWS膜蛋白CAR阳性率检测难题,ag尊龙凯时用PeptiNanodisc轻松解决!
来源:汪影荣 日期:2025-07-26在CAR-T细胞治疗日益成熟的背景下,如何准确评估CAR在T细胞表面表达的水平已成为临床前质控、放行标准及疗效预测的关键因素。其中,“CAR阳性率”(%CAR⁺)作为最直观的指标,通常通过流式细胞术、ELISA等技术来检测CAR与其靶抗原的结合能力。为了准确检测CAR在细胞表面的表达情况,研究人员常采用不同类型的试剂,各具特点与适用场景。
Protein L是一种广泛使用的通用性检测试剂,能与抗体的κ轻链结合,并能检测多种靶点构建的CAR-T细胞,操作简单且适用性强。然而,其识别范围有限,仅能识别人源VκⅠ、VκⅢ和VκⅣ亚型以及鼠源VκⅠ亚型,无法识别VκⅡ亚型及大部分鼠源Ig的其他亚型轻链,因此在某些背景下存在检测盲区。
lAnti-Fab抗体能够识别抗体Fab区域,具备一定的通用性,常用于检测不同靶点的CAR构建。然而,这类试剂通常来源于多克隆抗体,导致背景值较高、批间差异性大,且商品化产品的质量参差不齐,影响数据的重复性与准确性。Anti-idiotype抗体是一种高度特异性工具,能够直接识别scFv结构中的抗原结合位点,具备高特异性、高灵敏度和低背景等优势,是CAR特异性检测的理想选择。但由于其高度专属性,市售产品稀缺,常需定制开发,周期较长(一般为6个月),不适合快速筛查或标准质控流程。
靶点蛋白作为检测工具也是一项常用策略。这种方法依赖于CAR结构中scFv与目标抗原的结合特性,具备良好的靶点专属性,能够在一定程度上评估CAR与靶标的功能性结合能力。然而,其检测灵敏度会受到scFv与靶蛋白之间亲和力的显著影响,弱亲和力可能导致信号不强或假阴性。此外,靶点蛋白的纯度和构象等因素也直接影响检测结果。
因此,在CAR阳性率的检测中,如何以简便、稳定的方式展示天然构象的跨膜蛋白,成为关键的突破点。为实现更真实、稳定且高通量的CAR阳性率评估,亟需一种能够精准重现靶抗原天然构象、简化操作流程并降低检测背景的新型工具。ag尊龙凯时推出的PeptiNanodisc平台,凭借其独特的短肽自组装机制,为跨膜蛋白在CAR检测中的展示提供了全新的解决方案。
PeptiNanodisc是基于短肽自组装的膜蛋白重构平台,由两段人工设计的两性α-肽包裹目标膜蛋白形成纳米盘,无需添加脂质或膜支撑蛋白。这项技术可以稳定重构多类膜蛋白,尤其适用于呈现天然构象的跨膜靶点,为CAR-T细胞检测等功能研究提供支持。
在CAR-T检测体系中,优秀的靶抗原材料必须满足三个核心标准:结构真实、检测稳定和适配性强。PeptiNanodisc在这三方面均实现了突破,为CAR阳性率检测带来了多个重要优势。PeptiNanodisc可在不添加额外脂质或膜支撑蛋白的条件下,将靶抗原重构为稳定的类原生构象状态。对于结构复杂的膜蛋白,PeptiNanodisc能够保留其跨膜区与结构域之间的空间关系,显著还原其在细胞膜上的三维状态。这意味着CAR分子识别的将不再是“蛋白碎片”,而是完整靶标,极大提升了CAR与目标结合的亲和力与特异性,从而提高检测阳性率,降低假阴性风险。
传统的融合蛋白在体外环境中容易聚集或变性,导致实验重复性差。而PeptiNanodisc重构后的抗原具有良好的热稳定性和结构一致性,可在多种检测条件下表现出出色的抗性。此外,PeptiNanodisc中无脂质背景,无Fc区、非特异性标签,减少了抗体的背景结合,显著提高流式和ELISA等免疫检测平台的信噪比,使结果更清晰、判读更可靠。
PeptiNanodisc的构建灵活,支持多种标签及多样化功能修饰,能够广泛应用于不同的检测方式。其标准化纯化流程及良好可溶性非常适合大批量生产和自动化检测平台的对接,从而促进质控流程的标准化。这种“合成可控”的构建方式,特别适合在不依赖细胞表达或天然蛋白提取的条件下,大幅降低批间差异与制备难度。
ag尊龙凯时的PeptiNanodisc真正解决了“如何让CAR识别正确的抗原”这一核心难题,使CAR-T检测从“看得见”走向“看得准”,为CAR产品质控与结构优化提供了更真实、更稳定、更可靠的技术支撑。
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