人β干扰素(IFN-β) Elisa试剂盒使用说明

本试剂盒仅供科学研究使用，严禁用于医学诊断。以下是关于该试剂盒的详细说明和操作指导。

检测原理

本试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预先包被adropin（AD）抗体的微孔内，依次添加样本、标准品及HRP标记的检测抗体。经过温育与彻底洗涤后，使用TMB底物显色。在过氧化物酶的催化下，TMB首先转化为蓝色，随后在酸的作用下变为黄色。颜色的深浅与样本中adropin（AD）的浓度呈正相关。最后，使用酶标仪在450nm波长下读取吸光度（OD值），计算样本浓度。

样本收集、处理及保存

1. 血清：使用无热原和内毒素的试管，收集血液后进行3000转离心10分钟，迅速分离血清与红细胞。

2. 血浆：使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，3000转离心30分钟后取上清。

3. 细胞上清液：经过3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆：将组织与适量生理盐水混合捣碎，3000转离心10分钟取上清。

5. 保存：若样本未能及时实验，请分装并存储于-20℃，避免反复冻融。解冻时置于室温，以确保样本充分均匀解冻。

自备设备

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头：05-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

操作注意事项

1. 试剂盒应保存在2-8℃，使用前需在室温下平衡20分钟。注意，浓缩洗涤液在冰箱存放期间可能会结晶，温水加热可使其溶解。

2. 未使用的微孔应立即放回自封袋中，密封存放。

3. 标准品（S0号）浓度为0，可以作为阴性对照。样本需经过5倍稀释，最终结果需乘以5以获得实际浓度。

4. 严格按照说明书中规定的时间、加液量和顺序进行操作。

5. 使用前，请充分摇匀所有液体组分。

试剂盒组成

本试剂盒包含以下物品：微孔酶标板、标准品、样本稀释液、HRP标记的检测抗体、洗涤缓冲液、底物A和B、终止液、封板膜、说明书和自封袋。标准品的浓度依次为：0、25、50、100、200、400pg/mL。

试剂的准备及洗板方法

洗涤缓冲液需按1:20比例稀释，手工洗板时每孔加满洗涤液，静置1分钟后甩去液体，重复五次。若使用自动洗板机，每孔注入350μL洗液，浸泡1分钟后洗板5次。

操作步骤

1. 从室温平衡后的铝箔袋中取出所需微孔，其余存放在自封袋中并冷藏。

2. 设置标准品和样本孔，向标准品孔加入50μL不同浓度的标准品。

3. 在样本孔中先加入待测样本10μL，再加入40μL样本稀释液。空白孔不加样本。

4.向每个标准品孔和样本孔中添加100μL HRP标记的检测抗体，使用封板膜覆盖，温育于37℃水浴或恒温箱中60分钟。

5. 弃去反应液，洗涤并干燥，每孔加入底物A和B各50μL，在37℃下避光孵育15分钟。

6. 加入终止液50μL，并在15分钟内读取450nm波长下的OD值。

结果判断

绘制标准曲线，以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制线性回归曲线，根据方程计算样本浓度值。

试剂盒性能

1. 准确性：标准品线性回归R值≥0.9900。

2. 灵敏度：最低检测浓度<10pg/mL。

3. 特异性：无交叉反应。

4. 重复性：板内、板间变异系数均<15%。

5. 贮藏：在2-8℃避光防潮保存。

6. 有效期：6个月。

免责声明

1. 本试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，所产生的后果由实验者自行承担，ag尊龙凯时对此不承担任何责任。

2. 操作时必须严格按照说明书进行，任何违反均由实验者自负责任。